25. 购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？
研究人员在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或
培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，
加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80℃
太久。
26. 收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？
冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成
冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之
物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均
应立刻将冷冻管再一次扭紧 。
27. 如何选用特殊细胞系培养基？
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞，很可能在 DMEM 或
M199 中同样很容易生长。总之，首选 MEM 做粘附细胞培养、RPMI-1640 做悬浮细胞培
养是一个好的开始，各种目的无血清培养最好首选 AIM V（12005）培养基（SFM）。
28. L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的
能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降
解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对
于一些细胞具有毒性。
29. GlutaMAX-I 是什么？培养细胞如何利用 GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？
GlutaMAX-I 二肽是一个 L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的 alpha-氨基用 L-丙氨
酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放 L-谷氨酰胺供利用。 GlutaMAX-I 二肽非常
稳定，即使在 121 磅灭菌 20 分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同
条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。
30. 什么培养基中可以省去加酚红？ p
酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性
时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免
固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰
检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 31. 培养基中
丙酮酸钠的作用是什么？
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，
但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
32. 二价离子抑制胰蛋白酶活性吗？使用胰蛋白酶时加入 EDTA 的目的是什么？ 细胞培养文献
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二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保
持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用 EDTA 清洗细胞，以消除来自培
养基中所有的二价离子。 - ~# @6 \; l6 w* ^
33. 书上说，Hank‘s 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要 CO2 培养箱。原因是
什么？Hank’s 平衡盐溶液(HBS)和 Earle‘s 平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差
别？
HBS 和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在 Eagles (2.2g/L)中比在 Hanks
(0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的 CO2 平衡，以维持溶液的 PH 值。Eagles 液在
空气水平的 CO2 中，溶液会变碱，Hanks 液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在 CO2
培养箱中保存组织，需要用 Eagles 液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的
组织，用 Hanks 液就可以了。
血清
34. 保存血清最好的方法?
建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于 4℃时，请勿超过一个月。若您
一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。35. 如
何解冻血清才不会使产品质量受损?
建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于 2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之
全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
36. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?( R. r+ k5 |" i- S7 k
血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性
所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦
是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲
去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以 400g 稍微离心,上清液即
可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因
为它可能会阻塞您的过滤膜。
37. 为什么要热灭活血清?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞
和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养 ES 细胞，昆虫细
胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
